【热点应用】使用NanoSight Pro掌握细胞外囊泡荧光标记和分析白皮书

在本文及其所涉及的完整版白皮书中，介绍了NanoSigh Pro开发的细胞外囊泡（EVs）的荧光标记和检测方法，以及指导这些方法实施的代表性数据。

通过光散射和荧光分析评估细胞外囊泡大小分布和浓度。采用多种荧光染料和荧光基团，不仅正式了EVs的存在，而且还有效地检测了其表面和内部RNA货物上的四次跨膜蛋白生物标志物。

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细胞外囊泡（EVs）因其不断发展的应用和突破而引起了人们越来越大的探索兴趣，特别是在疾病诊断和治疗潜力领域。这些由活生物体内的细胞产生的物质最初被认为是细胞废物。然而，研究揭示了它们在细胞通讯中的关键作用。例如EVs的组成，可以反映其来源细胞的生理或病理状态，使之成为一些列疾病的生物标志物，从癌症到神经退行性疾病和炎症性疾病。

准确表征EVs制剂的大小、异质性和浓度可分析、了解生物功能和诊断提供重要信息。但从体液中提取的细胞外囊泡伴随着非EVs成分，形成了相当多样化的异质的系统，这对分析表征提出了重大挑战。

由于EVs的复杂性，通常采用多种技术方法来全面表征EVs，包括流式细胞术、蛋白质印迹、酶联免疫吸附测定（ELISA）、质谱蛋白质组学、基于显微镜的方法和纳米颗粒跟踪分析（NTA）。

NTA已成为快速表征细胞外囊泡高分辨率大小和浓度的常用技术。

NTA光学装置示意图

在本文涉及的研究报告中，使用来自尿液的EVs，通过光散射和荧光分析评估其大小分布和浓度。采用多种荧光染料和荧光基团，通过直接标记抗体进行生物标志物检测，使用NanoSight Pro对样品进行纳米颗粒跟踪分析，对每次荧光测量应用适当的激光波长和荧光长通滤光片，在NS Xplorer软件的专属荧光模式下，可在单次测量中对光散射和荧光进行组合分析，不仅报告尺寸分布，还直接报告浓度和荧光效率。

本白皮书阐述了如何使用NanoSight Pro探索各种标记方法，遵循染料特性（例如光稳定性和亮度）、样品制备方法（例如抗体亲和力和特异性、孵育条件）和测量条件（例如样品呈现、仪器设置、测量时间）等一些简单的规则，来实现荧光NTA检测EVs亚群，从而揭示细胞外囊泡EVs的不同特性。

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